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酶联免疫分析技术（ELISA）广泛用于抗原、半抗原或抗体的定量或定性分析，辣根过氧化物酶（HRP）及其偶联物是ELISA技术常用的一种酶，能催化底物如3,3'5,5'-四甲基联苯胺（TMB）发生显色反应，从而进行定量或定性分析。由于TMB比其他显色底物具更高的灵敏度且无致癌性被广泛使用，TMB主要用于ELISA，免疫斑点杂交或免疫组化等实验，也有报道将其用于氯的检测分析。

通常TMB显色试剂由多个组分构成，必须在使用前进行配制，并且容易产生沉淀，使用相对不便且容易导致检测结果不稳定。本品采用全新的TMB显色技术，将所有相关试剂全部配在一个溶液，即仅由单一溶液组成，不仅简化了操作步骤，而且使检测结果更加稳定可靠。

本系列产品专门为ELISA实验而设计。检测原理在于HRP或其他适当过氧化物酶能催化生成可溶的蓝色产物，此时通常可在370nm测定吸光度。当显色反应被酸性溶液（如0.5～2M H2SO4，0.5M HCl，1M H3PO4）终止后，产物由蓝色转为黄色，此时可在450nm测定吸光度。

我司提供三款ELISA专用的单组分TMB显色液（HRP显色用），分别是：标准级（KM0295）、高灵敏(KM0296)、超灵敏（KM0297)，从反应速率和反应灵敏度上来比较，依次递增~15%。其中，标准级TMB显色液显色敏感度高，线性浓度范围更宽，极其适合定量ELISA。超灵敏TMB显色液反应速率和反应灵敏度最高，极其适合定性ELISA。三款产品在应用上各有千秋，无绝对的应用倾向，主要还是根据自身的实验需求来选择。

本制品用于ELISA检测，每个样品通常使用0.1mL显色液，则100mL本品约检测1000个样品，500mL本品约检测5000个样品。

• 本品含TMB和H2O2，对人体有刺激性，请注意防护。
  
• 如发现本品出现浑浊或颜色变为蓝色，请停止使用。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 使用之前，取出适量单组份TMB显色液，使其回到室温再开始使用；
  
• 参考ELISA检测试剂盒的实验步骤，当与HRP标记抗体孵育一段时间后，用适当洗涤液洗涤3～5次，每次3～5min。
  
• 洗涤完毕后，去除洗涤液，加入100μL单组份TMB显色液。
  
• 室温避光孵育5～30min或更长时间（可长达24h），直至显色到预期深浅。
  
  • 建议根据实验需求选择最佳试剂用量、显色时间和反应温度。
• 直接在370nm测定吸光度。或者加入100μL 0.5～2M H2SO4或TMB终止液终止反应，随后在450nm测定吸光度。

• 背景显色太深
  
  • 如果背景（没有样品的对照）显色太深，一方面需考虑使用适当的封闭液进行封闭，如商业化封闭液或者和一抗相同来源的血清（10%）进行封闭。另一方面，使用经过适当吸附的二抗，以减小二抗的非特异性吸附。
    
  • 可以考虑缩短显色时间，或降低二抗浓度。另外，选择适当强度的洗涤液，或延长洗涤时间也会有所帮助。
• 没有显色或显色太弱
  
  • 适当提高一抗或二抗的浓度。检测二抗效果，滴一滴稀释二抗在离心管内，检测二抗是否被正常显色。
    
  • 可以考虑使用更加灵敏的放大检测体系，例如生物素检测体系。
    
  • 可以适当延长显色时间。
    
  • 如果上述改进不能获得预期效果，可以考虑更换效果更好的一抗或ELISA试剂盒。